WIRKSAMKEITSTESTS AN CRESCINA

Klinischer Test - Dermatologischen Klinik.

Datum: 15. Juli 1999

Diese klinische Studie belegt die Wirksamkeit von Crescina als Hilfsmittel des natürlichen Haarwuchses und als Präparat, das den Lichtungszustand der Kopfhaut zu reduzieren vermag. Die Studie wurde vom ärztlichen Team einer publiken Dermatologischen Klinik der Heilanstalt im Juli 1999 abgeschlossen.
Im Verlauf der sechsmonatigen Studien wurden 30 freiwillige Probanden, darunter 19 Männer und 11 Frauen im Alter zwischen 20 und 52, der Behandlung unterzogen. Die männlichen Testpersonen wiesen Haarlichtungen bis zum 5. Grad der Hamilton-Skala, die Frauen bis zum 3. Grad der Ludwig-Skala auf. Die rechte Seite der Kopfhaut wurde mit der Lotion Crescina, die linke Seite mit einer Scheinlotion behandelt.
Nach zweimonatiger Behandlung konnte an der mit Crescina behandelten Kopfhautpartie ein Nachwuchs festgestellt werden, der für gut bei 13 von 30, für zufriedenstellend bei 13 von 30 und für gering bei 4 von 30 Testpersonen befunden wurde. Daraus geht hervor, dass nach zwei Monaten bei allen behandelten Testpersonen ein Ergebnis verzeichnet werden konnte. Bei 86,6% wurde das Resultat zwischen zufriedenstellend und gut eingestuft.

Nach 4 Monaten wies die klinische Studie einen wie folgt eingestuften Nachwuchs aus:
- gut bei 21 von 30 Testpersonen
- zufriedenstellend bei 7 von 30 Testpersonen
- gering bei 2 von 30 Testpersonen.

Nach 4monatiger Behandlung wurde bei 93,3% der behandelten Testpersonen ein für zufriedenstellend bis gut befundenes Nachwuchsergebnis bestätigt.

Nach 6 Monaten wurde folgende Resultate ermittelt:
- guter Nachwuchs bei 25 von 30 Testpersonen
- zufriedenstellender Nachwuchs bei 5 von 30 Testpersonen.

Das bedeutet, dass der gesamte Kreis der freiwilligen Probanden von zufriedenstellend bis gut reichende Resultate verzeichnet hat. Das an der mit dem Placebo behandelten Kopfhautpartie erreichte Resultat wurde als belanglos oder gering klassifiziert. Im Laufe der klinischen Studie wurden jedoch nicht nur die Nachwuchsbefunde klassifiziert, sondern auch diejenigen, die sich auf die Widerstandskraft und den trophischen Zustand des Haars und den Lichtungsgrad beziehen.
- Widerstandskraft des Haars nach 6monatiger Behandlung: gut bei 27 von 30 Testpersonen, zufriedenstellend bei 3 von 30 Testpersonen.
- Trophischer Zustand des Haars nach 6monatiger Behandlung: gut bei 28 von 30 Testpersonen, zufriedenstellend bei 2 von 30 Testpersonen.
Der Vergleich des Lichtungszustands verdient eine gesonderte Erwähnung, da er eine größere Relevanz hat (insofern diese ihm von den Testpersonen beigemessen wird) und stark diversifiziert ist, da die Testpersonen voneinander extrem verschiedene Ausgangssituationen aufwiesen.

Der Chefarzt der Dermatologischen Klinik drückte sich bei der abschließenden Gesamtauswertung nach 6monatiger Behandlung folgendermaßen über den Lichtungszustand aus: Gut bei 21 Testpersonen, zufriedenstellend bei 9 Testpersonen.
Bemerkenswert ist außerdem, dass sich der Lichtungszustand bei 50% der Probanden bereits nach nur 2monatiger Behandlung gebessert hatte.

Klinisch-instrumentaler Test am Institut für Chemische Forschungen und Bioengineering (Mailand)

Datum: 5. Mai 1999

Der Test, der “Klinische Studie zur Auswertung der von einer Haarlotion (Crescina) entfalteten Aktion bei von Haarschwund infolge von Alopecia androgenetica und/oder Defluvium capilliti betroffenen Probanden”, getitelt war, wurde an einer Gruppe von 25 Freiwilligen, darunter 14 Frauen und 11 Männern im Alter zwischen 23 und 45, durchgeführt, die von Alopecia androgenetica gemäß Grad 1-2 der Ludwig-Skala bzw. gemäß Grad 2-3 der Hamilton-Skala und/oder an Defluvium betroffen, sonst in gutem Gesundheitszustand waren und ihre Einwilligung gegeben hatten. Für den Abschluss der Behandlung haben sich 22 der 25 anfänglichen Probanden entschieden.

Klinisch-instrumentaler Test am Institut für Chemische Forschungen und Bioengineering, (Mailand)

Datum: 20. Februar 2001.

Der Test, der “Klinische Studie zur Auswertung der von einer Haarlotion (Crescina) entfalteten Aktion bei von Haarschwund infolge von Alopecia androgenetica und/oder Defluvium capilliti betroffenen Probanden”,getitelt war, wurde an einer Gruppe von 42 mit Crescina behandelten Testpersonen im Rahmen einer umfangreicheren Studie an 84 Testpersonen zwecks eines Vergleichs von Crescina mit einem anderen nach den gleichen Bestimmungen verwendeten Bezugsprodukt durchgeführt.
Anwendung: Direkt auf die Kopfhaut an den am stärksten gelichteten Stellen mittels sanfter Massage bis zum kompletten Einziehen aufgetragene Lotion (2,5 ml).
Bei der Ausgangssituation (T0), nach zwei (T2) und nach drei Monaten (T3) wurde jeweils ein Phototrichogramm aufgenommen.
Außerdem wurde in jedem der drei Zeitabschnitte (0, 2, 3) ein Foto eines von Alocepia betroffenen Areals aufgenommen.
Probanden. 42 Freiwillige, darunter 24 Frauen, 18 Männer. Betroffen von unterschiedlichem Alopecia-Grad: 1-2 der Ludwig-Skala die Frauen, 2-3-4-5 der Hamilton-Skala die Männer. Im Laufe der Behandlung gab es 5 Ausfälle.
Es blieben 37 protokollierte Probanden übrig.

- Testresultate
Phototrichogramm an Testpersonen mit diagnostiziertem Defluvium.

- Schlussfolgerungen
Crescina ist in der Lage, eine trophische Wirkung auszuüben, d.h. den Haarwuchs bei von Haarlschwund verschiedener Art betroffenen Personen anzuregen.
Bei Personen mit diagnostiziertem Defluvium: Besserung nach zweimonatiger Behandlung.
Bei Personen mit diagnostizierter Alopecia: Vermehrung der Haaranzahl in der Anagenphase im Vergleich zur Telogen-/Katagenphase. Sowohl an Frauen als auch Männern festgestellter Effekt.

EINIGE WÄHREND DEN TESTS AUFGENOMMENE FOTOS

KLINISCHE STUDIE ZUR AUSWERTUNG DER VON EINER HAARLOTION ENTFALTETEN AKTION BEI VON HAARSCHWUND INFOLGE VON ALOCEPIA ANDROGENETICA UND/ODER DEFLUVIUM BETROFFENEN PROBANDEN - INSTITUT FÜR KLINISCHE FORSCHUNGEN UND BIOENGINEERING.
FOTOGRAFISCHE AUFNAHMEN WÄHREND DER ELEKTRONISCHEN ZÄHLUNG DER HAARE.

EINIGE WÄHREND DEN TESTS AUFGENOMMENE FOTOS

KLINISCHE STUDIE ZUR AUSWERTUNG DER VON EINER HAARLOTION ENTFALTETEN AKTION BEI VON HAARSCHWUND INFOLGE VON ALOCEPIA ANDROGENETICA UND/ODER DEFLUVIUM BETROFFENEN PROBANDEN - INSTITUT FÜR KLINISCHE FORSCHUNGEN UND BIOENGINEERING.
FOTOGRAFISCHE AUFNAHMEN EINES VON ALOCEPIA BETROFFENEN AREALS (HAARANSATZLINIE IM RECHTEN STIRN-SCHLÄFENBEREICH).

"IN VITRO" TEST

Effects of Crescina® on human primary epidermal and dermal cells -
Investigators: V C Biotechnology

Aim of project
It has been tested a preparation formed by the nucleus of Crescina hair treatment active principles in an aqueous solution and with the following composition: aqua, glycerin, lysine hydrochloride, acetyl cysteine, glycoproteins.

The objectives of this project were the following:

Objective 1
We investigated effects of Crescina on human primary keratinocytes and fibroblast cell proliferation

Objective 2
We investigated the effects of Crescina on protein synthesis in human in primary human keratinocytes and fibroblasts.

Abbreviations used
NHEK: Normal human epidermal keratinocytes
NHDF: Normal human dermal fibroblasts
SD: Standard deviation
MV: Mean value

Study protocol

Objective 1

Cell Cultures. Primary human keratinocytes and fibroblasts were obtained from Promocell (Heidelberg, Germany). Cells were maintained in specific growth medium supplemented with growth factors and seeded in 96 well plates (10 000 cells/well) for determination of cell proliferation and in 24 well plates for protein synthesis. Cells were treated for different period of time (24, 48 and 72 hours) with increasing concentrations (0.031, 0.062, 0.125, 0.25, 0.5% w/v = 310 µg/ml, 620.5 µg/ml, 1.25 mg/ml, 2.5 mg/ml, 5 mg/ml provided as 0.31 µl, 0.62 µl, 1.25 µl, 2.5 µl, 5 µl) of a solution of Crescina. Medium was removed before stimulation and replaced by fresh medium without growth factors. The growth factor supplements, as well as the growth factors PDGF (platelet derived growth factor) and FGF (fibroblast growth factor), were used as positive controls. Not-treated cells have been used as negative control.

Determination of cell proliferation.
Fibroblasts or keratinocytes were incubated with Crescina for 24 h, 48 h, and 72h. Each dose (see above) was tested 16 times (8 wells on 2 plates with two different methods).
Proliferation of primary fibroblasts/keratinocytes was determined by:

Determination of protein content.
Human primary keratinocytes or fibroblasts from human skin origin were seeded in 24 or 6 well plates and incubated with the Crescina (5 doses see above) for different times (24, 48 and 72 hours) with n = 4. After cell treatment, cells will be washed with phosphate buffered saline (PBS) and lysed in 1.3 x SDS (sodium dodecyl sulfate)-containing sample buffer without DTT containing 100 µM orthovanadate (Laemmli, 1970). Lysates will be homogenized by repeated passage through a 26-gauge-needle. Protein contents will be measured using the bicinchoninic acid method (BCA protein determination kit from Pierce, distributed by KFC Chemikalien, München, Germany) according to the manufacturer’s instructions (standards (bovine serum albumine, Sigma) ranging form 0.2 µg/µl to 4 µg/µl; optical density read at 570 nm). This method is a well established method to determine protein content and was part of at least 20 high impact publications from our group (e.g. Akundi et al., 2004).

Deviations:
To obtain more valid data in fibroblasts, additional experiments were performed using less cell numbers (1 000 and 5 000), and two additional time points.

Results and Discussion

Determination of cell proliferation.
On human keratinocytes experiments, at all tested time points 24, 48 and 72 h, Crescina had no effect on DNA synthesis as measured by dBrdU incorporation.
In contrast, Crescina revealed to increase the reaction of AlamarBlue. This effect was significant, suggesting that Crescina has an effect on cell viability (underlining values > 100% of metabolic activity) compared to non-treated cells (negative control) which cell vitality was considered as 100%. The effects were especially evident with 0.5% of the product Crescina with a maximum value of + 55% at 24 h (Fig. 4) and with 0.25% of the product Crescina with maximum values of + 56.3% at 48 h (Fig. 5) and + 61.6% at 72 h. Furthermore, our data suggest, that Crescina increases the metabolic activity of cells by increasing cellular energy levels.

At all tested time points fibroblastic DNA synthesis was not affected by Crescina, even if it’s possible to notice a quite moderate effect on DNA synthesis as measured by dBrdU incorporation (maximum value + 5.1% with 0.25% of the product Crescina after 48 h) in comparison with non-treated cells.
In the fibroblast experiments using the AlamarBlue method, additional experiments were performed using an inferior number of cells (1 000 and 5 000 cells/well) and two additional time points (4 and 6 h) just to obtain data of major validity. The use of 10 000 cells as starting point did not gain significant data since the fibroblasts are rapid proliferating cells and therefore cell proliferation and metabolism was probably maximal and not further increasable with this amount of cells suggesting that cell metabolism was already decreased due to cell to cell interaction lowering the proliferation rate of the cells.
In the AlamarBlue assays with 1 000 cells/well, Crescina showed a quite moderate increase of metabolic activity, compared to the negative control, after 4 and 6 h with maximal values of + 14.5 % and + 20.5% respectively, both with 0.5% of Crescina.
Very potent effects were obtained after 24, 48, and 72 h (Figs. 13-14) with maximal increase in the metabolic activity of + 58.5% with 0.125% of Crescina at 24 h, + 111.4% with 0.25% of Crescina at 48 h and + 195.7% with 0.5% of Crescina at 72 h, compared to negative control.
Furthermore, in the AlamarBlue assays determining the Crescina effects on cell proliferation with 5 000 cells/well, Crescina showed an increase in the metabolic activity, compared to non-treated cells (negative control), 4 and 6 h with maximal values of + 33.1% and + 36.5% both with 0.5% of Crescina.
Very potent effects were detected after 24, 48, and 72 h (Figs. 18-19) showing an increase in metabolic activity of + 80.3% with 0.0625% of Crescina at 24 h, + 119.3% with 0.5% of Crescina at 48 h, and + 91.4% with 0.5% of Crescina at 72 h, all of them compared to negative control.
In this way, Crescina increased AlamarBlue reactivity when 5 000 cells were seeded but not as potent as with 1 000 cells per well.
Only slight effects were visible after 24 h, when 10 000 cells where seeded (+ 20.2% with 0.5% of Crescina), and no effects after 48 and 72 h (Fig. 20), suggesting that the proliferation and the viability of cells is not further increasable after later time points. This indicated, that the number of cells is critical for obtaining effects of Crescina and that the number of 10 000 cells is to high to induce cell viability by possible cell to cell interactions occurring in confluent cell layers.

Determination of protein content.
Determination of protein content performed using keratinocytes revealed that, compared to non-treated cells, Crescina increased protein content (+ 160.3%) at the dose of 0.125% of Crescina at 24 h, at the doses of 0.0625% (+ 242.1%) and 0,125% (+ 206.8%) after 48 h and, at least, after 72 h with 0.25% of Crescina it’s possible to notice an increase of protein content of + 73.9% (Fig. 23, 24).
No increase in protein content was visible in fibroblasts after 24 h, but a slight increasing effect after 72 h: + 51.4% with the exposition at 0.125% of Crescina.

Conclusions

Determination of cell proliferation.
Using human keratinocytes, the preparation Crescina had no effects on DNA synthesis as measured by dBrdU incorporation at all tested time points 24, 48 and 72 h.
However, Crescina increased the metabolic activity of cells by increasing cellular energy levels as revealed by the reaction of AlamarBlue.
Using human fibroblasts, Crescina had no effect on DNA synthesis as measured by dBrdU incorporation at all tested time points 24, 48 and 72 h.
In the AlamarBlue assays, very potent effects were obtained after 24, 48, and 72 h with an increase in the metabolic activity compared to non-treated cells .
Our data suggest that due to its positive effects on cell viability and metabolism as shown by the AlamarBlue assays, Crescina should also increase the cell number. Furthermore, we conclude that the treatment with Crescina increases cell life, finally resulting in increased cell numbers, if compared to untreated cells, which have a more rapid cell turnover. This increase in cell numbers in Crescina treated cells, will not increase DNA synthesis as observed in this study.

Determination of protein content.
Determination of protein content in keratinocytes revealed that Crescina increased protein content considerably after 24 h (+ 160.3%) and 48 h (+ 242.1%) compared to negative control.
In fibroblasts, a slight increasing effect was visible after 72 h (+ 51.4%) compared to non-treated cells.
The difference in the total protein content between keratinocytes and fibroblasts is due to the differences in the total cell volume between the epithelial keratinocytes and the smaller fibroblasts.
Therefore, the protein content has not increased in consequence of the pro-proliferative effect of Crescina, but it might be increased due to increased cell viability. This fits to the hypothesis that Crescina promotes cellular metabolism.

Finally, we demonstrated that preparation Crescina increased cell metabolism and therefore might act as a cell protective and energizing hair treatment.

Figures

DIE WIRKSAMKEITSBESTÄTIGUNGEN VON CRESCINA

Labo hielt es im Hinblick auf ihre Forschung, die Werbung und die Handelspolitik für richtig und angemessen, den Markt zu befragen, um die Meinung der Primärkundschaft – Apotheker – und der Endanwender – Verbraucher – über die Produktgüte und ihren Zufriedenheitsgrad einzuholen. Die Umfragen haben überdurchschnittlich positive Ergebnisse ergeben.

A) Wirksamkeitsbestätigungen seitens der Apotheker

Labo hat direkte Aussagen der Apotheker über die Produktgüte und die Zufriedenheit ihrer Kunden zusammengetragen. Eine repräsentative Stichprobe der Zielgruppe bildeten die 497 über das ganze Land gestreuten Apotheken.
Die befragten Apotheken hatten einen folgendermaßen konzipierten Fragebogen abzustempeln und zu unterzeichen: